Характеристика антимикробных веществ (часть 3)
4-12-2013, 21:17
В заключение следует остановиться еще на значении устойчивых форм для предварительной идентификации антибиотиков и их продуцентов. На этом был основан метод, который в последнее время нашел широкое применение в практике. В основе его лежит тот факт, что микроорганизмы, устойчивые к определенному антибиотическому веществу, устойчивы также к антибиотикам, близким к нему по своему строению и биологическому действию. Идентификация неизвестного антибиотического вещества может быть проведена посредством испытания действия этого вещества на ряд чувствительных и устойчивых к различным известным уже антибиотикам тест-организмов и этим можно установить сходство с каким-либо известным антибиотиком испытуемого препарата. Стенсли разработал для этой цели специальную методику.
Чтобы выяснить, является ли выделенный антагонист продуцентом еще неизвестного антибиотика или же этот организм продуцирует уже известное вещество, проводят его посев на агаризованную питательную среду. Пересекая ее чувствительным и устойчивыми к известному антибиотику культурами тест-организмов, можно определить, сходен ли антибиотик изучаемого организма с известным уже антибиотиком.
Что касается методики получения устойчивых форм микробов в лабораторных условиях, то она различна. Однако в основе ее лежит один и тот же принцип, заключающийся в том, что изучаемый организм пересевается на среды, содержащие все возрастающие концентрации антибиотика. Применяются как жидкие, так и агаризованные среды. По данным Н.С. Егорова, наиболее удобный и сравнительно скорый метод получения резистентных форм микробов — метод наклонных агаровых пластинок. При этом в чашки Петри агар наливается в два слоя. Нижний слой, налитый в наклонно поставленную чашку, образует при остывании наклонную поверхность. После перевода чашки в горизонтальное положение на наклонную поверхность первого слоя наливают еще 20 мл питательного агара, содержащего антибиотик в концентрации, в 3—10 раз превышающей бактериостатическую для изучаемого организма. При последующей инкубации происходит диффузия антибиотика в нижний слой, причем в верхнем слое антибиотик распределяется пропорционально толщине агара. Поверхность второго слоя агара засевается густой суспензией изучаемого организма. На месте высокой концентрации антибиотика обычно вырастают только резистентные формы, из которых готовят бульонную суспензию и высевают на следующую чашку, приготовленную тем же способом, но содержащую в верхнем слое антибиотик в 2—5 раз более высокой концентрации, чем в предыдущей чашке. Такие пересевы делают последовательно до тех пор, пока не получат штаммы нужной резистентности.
В лабораторной практике для получения резистентных форм широкое применение нашел и пробирочный метод на агаризованных средах. Этот метод состоит в том, что в пробирки с расплавленным и охлажденным до 50—55° питательным агаром добавляют все повышающиеся концентрации антибиотика, к которому хотят получить резистентные формы. После тщательного перемешивания пробирки помещают в наклонное положение для получения агаровых косячков, на которых засевают затем изучаемых организм. Получение устойчивых форм на жидкой питательной среде осуществляется примерно таким же способом.
Чтобы выяснить, является ли выделенный антагонист продуцентом еще неизвестного антибиотика или же этот организм продуцирует уже известное вещество, проводят его посев на агаризованную питательную среду. Пересекая ее чувствительным и устойчивыми к известному антибиотику культурами тест-организмов, можно определить, сходен ли антибиотик изучаемого организма с известным уже антибиотиком.
Что касается методики получения устойчивых форм микробов в лабораторных условиях, то она различна. Однако в основе ее лежит один и тот же принцип, заключающийся в том, что изучаемый организм пересевается на среды, содержащие все возрастающие концентрации антибиотика. Применяются как жидкие, так и агаризованные среды. По данным Н.С. Егорова, наиболее удобный и сравнительно скорый метод получения резистентных форм микробов — метод наклонных агаровых пластинок. При этом в чашки Петри агар наливается в два слоя. Нижний слой, налитый в наклонно поставленную чашку, образует при остывании наклонную поверхность. После перевода чашки в горизонтальное положение на наклонную поверхность первого слоя наливают еще 20 мл питательного агара, содержащего антибиотик в концентрации, в 3—10 раз превышающей бактериостатическую для изучаемого организма. При последующей инкубации происходит диффузия антибиотика в нижний слой, причем в верхнем слое антибиотик распределяется пропорционально толщине агара. Поверхность второго слоя агара засевается густой суспензией изучаемого организма. На месте высокой концентрации антибиотика обычно вырастают только резистентные формы, из которых готовят бульонную суспензию и высевают на следующую чашку, приготовленную тем же способом, но содержащую в верхнем слое антибиотик в 2—5 раз более высокой концентрации, чем в предыдущей чашке. Такие пересевы делают последовательно до тех пор, пока не получат штаммы нужной резистентности.
В лабораторной практике для получения резистентных форм широкое применение нашел и пробирочный метод на агаризованных средах. Этот метод состоит в том, что в пробирки с расплавленным и охлажденным до 50—55° питательным агаром добавляют все повышающиеся концентрации антибиотика, к которому хотят получить резистентные формы. После тщательного перемешивания пробирки помещают в наклонное положение для получения агаровых косячков, на которых засевают затем изучаемых организм. Получение устойчивых форм на жидкой питательной среде осуществляется примерно таким же способом.