Метод диффузии (часть 1)
4-12-2013, 21:38
Метод диффузии основан на способности антибиотических веществ диффундировать в толщу агара и задерживать рост или убивать микроорганизмы. В связи с тем, что определение ведется главным образом в чашках Петри, метод этот получил еще название «чашечного». Применение его при изучении антагонизма и антибиотических веществ имеет свою историю. Впервые его применил в 1881 г. Гарре. Этот автор наносил на поверхность агара в чашке Петри параллельные пли расходящиеся от центра штриховые посевы двух микробных культур: антагониста и тест-организма. Антибиотическое вещество, выделяемое антагонистом при его развитии, угнетало либо убивало тест-объект.
Фрост делал сплошной посев тест-организма, а затем поверх наносил штрихи антагониста. Около таких штрихов развития тест-организмов не было. Мак-Лоуд и Гавенлок, учитывая потребность антагонистов и тест-организмов в средах разного состава, видоизменили этот метод, выращивая вначале культуру антагониста, а затем наливая поверх него второй слой агара, который засевали тест-организмом. Флеминг применял чашечный метод для определения антибиотической активности организмов, выращенных на жидких средах. На питательной среде в чашке Петри делали желобок, который заполняли культуральной жидкостью продуцента антибиотика вместе с расплавленным агаром. Перпендикулярно к желобку штрихами засевали тест-культуры. Чувствительные к антибиотику микроорганизмы росли на определенном расстоянии от края желобка.
Следует, однако, отметить, что приведенные выше способы чашечного метода широкого распространения в практике не получили. В процессе развития учения об антагонистах и антибиотических веществах совершенствовались и методы их испытания. В настоящее время наиболее широко разработан метод диффузии в агар с использованием цилиндриков из нержавеющей стали, алюминия или стекла, а также метод наложения бумажных дисков из фильтровальной бумаги. В соответствии с литературными данными основные условия сводятся к следующему.
1. Испытание должно проводиться на средах определенного состава, так как диффузия антибиотика различна в зависимости от состава питательного агара. Большое значение при этом имеет pH среды. Так, например, для антибиотиков типа стрептомицина и стрептотрицина зона угнетения тест-микроба увеличивается по мере повышения pH субстрата; для ауреомицина и террамицина она уменьшается, а для хлоромицетина не меняется.
2. Густота посева тест-организмов должна быть постоянной для каждой серии опытов.
3. Длительность контакта антибиотика со средой перед посевом тест-организма должна быть постоянной, так как зона угнетения зависит от времени контакта антибиотика с агаром, и величина ее неодинакова для различных антибиотиков. Установлено также, что между моментом посева тест-организма и моментом его прорастания проходит определенный промежуток времени, в течение которого антибиотик продолжает диффундировать в агар.
4. Концентрации испытуемых и стандартных растворов антибиотика не должны быть высокими. Только для слабых концентраций антибиотика диаметр зон задержки роста пропорционален концентрации антибиотика. При концентрациях выше определенного предела диаметры зон бывают одинаковыми. Так, например, зоны одинаковы у 5- и 10%-ных растворов неомицина, 10- и 20%-ных растворов стрептомицина и т. д.
5. Чашки Петри, используемые для опытов, должны иметь ровное дно и один и тот же диаметр, так как толщина агарового слоя оказывает влияние на диффузию антибиотика.
6. Необходимо иметь горизонтальный столик на винтах, выверенный по уровню.
Качественные фланцы воротниковые http://www.invito.ru/ используются для разъемного соединения отдельных частей и составных корпусов резервуаров, аппаратов и трубопроводов. Применяются на предприятиях газовой, нефтяной, нефтеперерабатывающей, химической, нефтехимической промышленности, энергетического комплекса, коммунального хозяйства. Долгий срок службы и адекватные цены.
Фрост делал сплошной посев тест-организма, а затем поверх наносил штрихи антагониста. Около таких штрихов развития тест-организмов не было. Мак-Лоуд и Гавенлок, учитывая потребность антагонистов и тест-организмов в средах разного состава, видоизменили этот метод, выращивая вначале культуру антагониста, а затем наливая поверх него второй слой агара, который засевали тест-организмом. Флеминг применял чашечный метод для определения антибиотической активности организмов, выращенных на жидких средах. На питательной среде в чашке Петри делали желобок, который заполняли культуральной жидкостью продуцента антибиотика вместе с расплавленным агаром. Перпендикулярно к желобку штрихами засевали тест-культуры. Чувствительные к антибиотику микроорганизмы росли на определенном расстоянии от края желобка.
Следует, однако, отметить, что приведенные выше способы чашечного метода широкого распространения в практике не получили. В процессе развития учения об антагонистах и антибиотических веществах совершенствовались и методы их испытания. В настоящее время наиболее широко разработан метод диффузии в агар с использованием цилиндриков из нержавеющей стали, алюминия или стекла, а также метод наложения бумажных дисков из фильтровальной бумаги. В соответствии с литературными данными основные условия сводятся к следующему.
1. Испытание должно проводиться на средах определенного состава, так как диффузия антибиотика различна в зависимости от состава питательного агара. Большое значение при этом имеет pH среды. Так, например, для антибиотиков типа стрептомицина и стрептотрицина зона угнетения тест-микроба увеличивается по мере повышения pH субстрата; для ауреомицина и террамицина она уменьшается, а для хлоромицетина не меняется.
2. Густота посева тест-организмов должна быть постоянной для каждой серии опытов.
3. Длительность контакта антибиотика со средой перед посевом тест-организма должна быть постоянной, так как зона угнетения зависит от времени контакта антибиотика с агаром, и величина ее неодинакова для различных антибиотиков. Установлено также, что между моментом посева тест-организма и моментом его прорастания проходит определенный промежуток времени, в течение которого антибиотик продолжает диффундировать в агар.
4. Концентрации испытуемых и стандартных растворов антибиотика не должны быть высокими. Только для слабых концентраций антибиотика диаметр зон задержки роста пропорционален концентрации антибиотика. При концентрациях выше определенного предела диаметры зон бывают одинаковыми. Так, например, зоны одинаковы у 5- и 10%-ных растворов неомицина, 10- и 20%-ных растворов стрептомицина и т. д.
5. Чашки Петри, используемые для опытов, должны иметь ровное дно и один и тот же диаметр, так как толщина агарового слоя оказывает влияние на диффузию антибиотика.
6. Необходимо иметь горизонтальный столик на винтах, выверенный по уровню.
Качественные фланцы воротниковые http://www.invito.ru/ используются для разъемного соединения отдельных частей и составных корпусов резервуаров, аппаратов и трубопроводов. Применяются на предприятиях газовой, нефтяной, нефтеперерабатывающей, химической, нефтехимической промышленности, энергетического комплекса, коммунального хозяйства. Долгий срок службы и адекватные цены.