Метод серийных разведений (часть 1)
4-12-2013, 21:38
Метод серийных разведений заключается в том, что антибиотическое вещество или культуральную жидкость разбавляют питательной средой в 2, 4, 8, 16 и более раз или в другом любом разведении, которое выбирают в зависимости от предполагаемой концентрации испытываемого антибиотика. Практически это осуществляется следующим образом. В стерильные пробирки одинакового диаметра стерильно разливается питательный бульон по 1 мл в каждую, после чего пробирки помещают на 1 сутки в термостат для проверки стерильности. Пробирки, в которых начался рост бактерий, выбрасывают. Затем 1 мл испытуемого раствора вносят в первую пробирку и тщательно перемешивают. Получается разведение 1 : 2. Из первой пробирки с разведением 1 : 2 один миллилитр жидкости переносят во вторую пробирку, где получается разведение 1 : 4, и т. д.
Для получения больших разведений готовят исходное разведение 1: 100. Затем 1 мл этого раствора смешивают с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 мл бульона. Получаются разведения 1 : 200, 1 : 300, 1 : 400, 1 : 500, 1 : 600, 1 : 700, 1 : 800. Для получения дальнейших разведений, последовательно отличающихся на 100,
0,5 мл раствора с разведением 1 : 100 смешивают с 4, 4,5, 5 и 5,5 мл бульона, получая соответственно разведение 1 : 900, 1 : 1000 1 : 1100 и 1 : 1200. В практической работе можно использовать самые разнообразные сочетания разведений.
Очень удобной является следующая схема титрования антимикробных веществ. Готовят раствор препарата (I) на воде или спирте в разведении 1 : 100 и ряд пробирок, содержащих по 2,5 мл стерильной жидкой питательной среды. Затем в первую пробирку вносят 0,25 мл раствора 1 и получают разведение 1 : 1000, во вторую — 0,1 мл, получая разведение 1 : 2500. Далее готовят раствор II из 0,1 мл раствора 1 с добавлением 0,9 мл воды. 0,5 мл полученного раствора вносят в третью пробирку, 0,25 мл в четвертую, 0,1 мл в пятую, получая соответственно разведения 1 : 5000, 1 : 10 000, 1 : 25 000. Затем снова готовят раствор III и поступают, как указано.
Тест-объект надо вносить в пробирки в определенном количестве, постоянном для данной серии опытов, в виде вегетативных клеток или спор. Тест-объект можно вносить в питательный бульон в определенном количестве и перед разливом его в пробирки. В литературе описаны различные способы подготовки тест-объекта для его внесения в пробирки с бульоном. Наиболее простой из них заключается в том, что одна петля тест-организма с твердого субстрата засевается в стерильный питательный бульон, инкубируется при температуре, оптимальной для развития этого организма. Затем одну каплю суточной культуры вносят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды.
Для получения больших разведений готовят исходное разведение 1: 100. Затем 1 мл этого раствора смешивают с 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 мл бульона. Получаются разведения 1 : 200, 1 : 300, 1 : 400, 1 : 500, 1 : 600, 1 : 700, 1 : 800. Для получения дальнейших разведений, последовательно отличающихся на 100,
0,5 мл раствора с разведением 1 : 100 смешивают с 4, 4,5, 5 и 5,5 мл бульона, получая соответственно разведение 1 : 900, 1 : 1000 1 : 1100 и 1 : 1200. В практической работе можно использовать самые разнообразные сочетания разведений.
Очень удобной является следующая схема титрования антимикробных веществ. Готовят раствор препарата (I) на воде или спирте в разведении 1 : 100 и ряд пробирок, содержащих по 2,5 мл стерильной жидкой питательной среды. Затем в первую пробирку вносят 0,25 мл раствора 1 и получают разведение 1 : 1000, во вторую — 0,1 мл, получая разведение 1 : 2500. Далее готовят раствор II из 0,1 мл раствора 1 с добавлением 0,9 мл воды. 0,5 мл полученного раствора вносят в третью пробирку, 0,25 мл в четвертую, 0,1 мл в пятую, получая соответственно разведения 1 : 5000, 1 : 10 000, 1 : 25 000. Затем снова готовят раствор III и поступают, как указано.
Тест-объект надо вносить в пробирки в определенном количестве, постоянном для данной серии опытов, в виде вегетативных клеток или спор. Тест-объект можно вносить в питательный бульон в определенном количестве и перед разливом его в пробирки. В литературе описаны различные способы подготовки тест-объекта для его внесения в пробирки с бульоном. Наиболее простой из них заключается в том, что одна петля тест-организма с твердого субстрата засевается в стерильный питательный бульон, инкубируется при температуре, оптимальной для развития этого организма. Затем одну каплю суточной культуры вносят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды.