Технология трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (часть 9)

29-01-2012, 18:45

Можно избежать переохлаждения среды, если при достижении точки замерзания или сразу же после прохождения ее появятся кристаллизационные центры. Для этого в раствор вводят небольшой кристаллик льда или сильно охлаждают стенки ампулы, например обжатием пинцетом, предварительно охлажденным в жидком азоте. При этом вначале образуется кристаллизационное облако, а затем идет кристаллизация жидкости по всей ампуле. При дальнейшем охлаждении замерзает оставшаяся чистая вода и все больше возрастает концентрация солей в оставшейся жидкой фазе, пока, наконец, раствор полностью не замерзнет.
Эмбрион, который на 20 % состоит из твердых составных частей и на 80 % из воды, подвержен двум негативным влияниям — образованию внутриклеточных кристаллов и воздействию высоких концентраций солей.
В связи с повышением концентрации соли в частично замерзшей среде выделение воды из эмбриона замедляется и, следовательно, повышается точка замерзания раствора. При медленном обезвоживании эмбриона затрудняется образование льда. Предпосылкой этому является медленное охлаждение, при котором достаточно времени для выделения воды. Подходящая скорость охлаждения, обеспечивающая медленную отдачу воды, 0,3° в минуту. Поэтому принудительная кристаллизация раствора нужна для того, чтобы избежать внутриклеточного образования льда.
При оттаивании эмбрионов все процессы происходят в обратном порядке. На границе поверхности с окружающей средой возникает концентрационный градиент, только в этом случае он обусловливает движение воды внутрь клетки.
Размер кристаллов воды зависит от скорости замерзания. Чем быстрее снижается температура, тем больше центров кристаллизации, следовательно, тем мельче будут кристаллы. Более эффективно двухступенчатое замораживание до -35 °С со скоростью 0,3° в минуту и непосредственное погружение эмбрионов в жидкий азот. Для сохранения жизнеспособности эмбрионов, замороженных при таком режиме, их лучше быстрее оттаивать.
При медленном замораживании до полного затвердевания биообъекта (до -60 °С) более надежно медленное (со скоростью 4-12° в минуту) оттаивание.