Технология трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (часть 7)
29-01-2012, 18:39
Бластоцисты-зародыши, у которых клетки дифференцированы на зародышевые и трофобластические, образуют первичную полость; оболочка нормальной толщины, первителлиновое пространство маленькое, полость бластоцисты небольшая. Число клеток в бластоцисте 80-120. На последней стадии деления (9 сут после осеменения) бластоциста выходит из прозрачной зоны. Различают бластоцисты нормально развитые, неравномерные, у которых одна или несколько клеток выступают за пределы округлого тела и имеют отличающиеся от остальных клеток размеры, а также дегенерирующие. На 6-е сут после осеменения преобладают поздние морулы (69,3 %), на 7-е — ранние бластоцисты (79,5 %), на 8-е — поздние бластоцисты (97 %) и на 9-е сут — бластоцисты, освободившиеся от прозрачной оболочки.
Чтобы отличить под микроскопом партеногенетические дробящиеся яйцеклетки или эмбрионы с фрагментацией от нормальных поздних морул, необходим большой практический опыт работы с эмбрионами разных стадий развития.
Отклонения от морфологической нормы часто могут иметь место у тех животных-доноров, которые подвергались воздействию высоких концентраций овариальных стероидов. Большинство зародышей обычно дегенерируют на стадии морулы. Кроме того, на качество эмбрионов может оказывать неблагоприятное влияние маточная среда. Количество дегенерированных эмбрионов растет до 8 сут. Аномалии в развитии зародышей возникают при продвижении их по яйцеводам, но выявляются они на более поздних стадиях, когда эмбрионы находятся в полости рогов матки. Число аномальных эмбрионов до 5-8-х сут составляет 17-53 %.
В условиях массовых пересадок эмбрионов с применением криоконсервирования морфологическое определение стадии развития состояния оболочек и внутренних структур эмбрионов осуществляется экспресс-методом, который может быть широко использован в практике трансплантации эмбрионов.
Оценка жизнеспособности эмбрионов с использованием флюоресцентных красителей основана на различной проницаемости красителей через оболочку живых или погибших клеток эмбриона. Для окрашивания используют: акрединоранж (АО), флюоресцин-диацетат (ФДА), 4,6-диамино-2-фенил-линдол (ДАПИ), 2,7-диамино-10-этил-9-фенил-фенал-тридиум бромид (ЭБ) или 1-анилино-нафталин-8-сульфанат (1,8-АНС). Эмбрион помещают на предметное стекло, добавляют соответствующий краситель, проводят инкубацию и исследуют под люминесцентным микроскопом.
Чтобы отличить под микроскопом партеногенетические дробящиеся яйцеклетки или эмбрионы с фрагментацией от нормальных поздних морул, необходим большой практический опыт работы с эмбрионами разных стадий развития.
Отклонения от морфологической нормы часто могут иметь место у тех животных-доноров, которые подвергались воздействию высоких концентраций овариальных стероидов. Большинство зародышей обычно дегенерируют на стадии морулы. Кроме того, на качество эмбрионов может оказывать неблагоприятное влияние маточная среда. Количество дегенерированных эмбрионов растет до 8 сут. Аномалии в развитии зародышей возникают при продвижении их по яйцеводам, но выявляются они на более поздних стадиях, когда эмбрионы находятся в полости рогов матки. Число аномальных эмбрионов до 5-8-х сут составляет 17-53 %.
В условиях массовых пересадок эмбрионов с применением криоконсервирования морфологическое определение стадии развития состояния оболочек и внутренних структур эмбрионов осуществляется экспресс-методом, который может быть широко использован в практике трансплантации эмбрионов.
Оценка жизнеспособности эмбрионов с использованием флюоресцентных красителей основана на различной проницаемости красителей через оболочку живых или погибших клеток эмбриона. Для окрашивания используют: акрединоранж (АО), флюоресцин-диацетат (ФДА), 4,6-диамино-2-фенил-линдол (ДАПИ), 2,7-диамино-10-этил-9-фенил-фенал-тридиум бромид (ЭБ) или 1-анилино-нафталин-8-сульфанат (1,8-АНС). Эмбрион помещают на предметное стекло, добавляют соответствующий краситель, проводят инкубацию и исследуют под люминесцентным микроскопом.