Технология трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (часть 10)
29-01-2012, 18:50
В итоге многолетних исследований наметились два направления криоконсервации эмбрионов сельскохозяйственных животных.
1. Медленное охлаждение биообъекта при минусовой температуре, когда процесс замораживания сопровождается дегидратацией клеток с последующим переходом в твердое состояние. Метод медленного замораживания включает и медленное оттаивание эмбрионов, при котором регидратация клеток протекает постепенно и их тонкая структура, а также биохимические и физиологические потенции остаются неповрежденными.
2. Эмбрионы при переходе на минусовые температуры медленно охлаждают до -38-40 °С, а затем резко замораживают в жидком азоте или другом аналогичном хладагенте. При таком методе полной дегидратации клеток не происходит, поэтому оттаивание производят с большой скоростью, помещая эмбрионы на несколько секунд в водяную баню при 37 °С.
В среду для замораживания обязательно включают криопротекторы в определенной концентрации. Во время замораживания постепенно увеличивается концентрация соли в среде и эмбрионе. Электролиты дестабилизирующе воздействуют на клетки мембраны. Криопротекторы, являющиеся низкомолекулярными неэлектролитами, могут проникать через мембрану клетки и при концентрации 1-2 молекулы на 1 л предохраняют мембраны от разрушения, в частности посредством уменьшения концентрации электролита при заданной температуре. Однако криопротектор увеличивает осмолярность среды, поэтому его следует вводить или извлекать постепенно, с тем чтобы между клетками и средой установилось осмотическое равновесие.
Имеется три вида криопротекторов: а) легко проникающие в клетки (диметилсульфоксид ДМСО и глицерин); б) непроникающие, но осмотически активные (сахароза); в) непроникающие и осмотические неактивные (поливинилпирролидон). Проникающие в клетку и осмотически активные криозащитные вещества достаточно широко используются в практической криобиологии.
Весь процесс глубокого замораживания состоит из отдельных этапов, от которых зависит эффективность метода: 1) получение эмбрионов; 2) подготовка эмбрионов к замораживанию; 3) собственно процесс замораживания; 4) хранение эмбрионов в жидком азоте; 5) процесс оттаивания; 6) оценка жизнеспособности эмбрионов путем культивирования либо пересадкой их подходящим реципиентам.
1. Медленное охлаждение биообъекта при минусовой температуре, когда процесс замораживания сопровождается дегидратацией клеток с последующим переходом в твердое состояние. Метод медленного замораживания включает и медленное оттаивание эмбрионов, при котором регидратация клеток протекает постепенно и их тонкая структура, а также биохимические и физиологические потенции остаются неповрежденными.
2. Эмбрионы при переходе на минусовые температуры медленно охлаждают до -38-40 °С, а затем резко замораживают в жидком азоте или другом аналогичном хладагенте. При таком методе полной дегидратации клеток не происходит, поэтому оттаивание производят с большой скоростью, помещая эмбрионы на несколько секунд в водяную баню при 37 °С.
В среду для замораживания обязательно включают криопротекторы в определенной концентрации. Во время замораживания постепенно увеличивается концентрация соли в среде и эмбрионе. Электролиты дестабилизирующе воздействуют на клетки мембраны. Криопротекторы, являющиеся низкомолекулярными неэлектролитами, могут проникать через мембрану клетки и при концентрации 1-2 молекулы на 1 л предохраняют мембраны от разрушения, в частности посредством уменьшения концентрации электролита при заданной температуре. Однако криопротектор увеличивает осмолярность среды, поэтому его следует вводить или извлекать постепенно, с тем чтобы между клетками и средой установилось осмотическое равновесие.
Имеется три вида криопротекторов: а) легко проникающие в клетки (диметилсульфоксид ДМСО и глицерин); б) непроникающие, но осмотически активные (сахароза); в) непроникающие и осмотические неактивные (поливинилпирролидон). Проникающие в клетку и осмотически активные криозащитные вещества достаточно широко используются в практической криобиологии.
Весь процесс глубокого замораживания состоит из отдельных этапов, от которых зависит эффективность метода: 1) получение эмбрионов; 2) подготовка эмбрионов к замораживанию; 3) собственно процесс замораживания; 4) хранение эмбрионов в жидком азоте; 5) процесс оттаивания; 6) оценка жизнеспособности эмбрионов путем культивирования либо пересадкой их подходящим реципиентам.